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ASOURCE TIMES

特写

我现在不能问PCR测试Iroha

了解检查的极限,注意慎重的判断和应对

为诊断新型冠状病毒感染症而进行的PCR检查。对于疑似感染的人和被定位为基本工作者的人,需要进行积极的检查,但PCR检查的准确性有限,对阳性和阴性的判断需要谨慎。总结了作为新型冠状病毒感染症检查的课题等。

了解目前无法听到的PCR检查伊洛哈检查的限制,并仔细判断和回应

将DNA序列的特定区域放大数十亿倍

PCR是聚合酶链反应 (polymerase chain reaction, polymerase chain reaction, polymerase chain reaction, polymerase chain reaction) 的简称,是一种利用DNA聚合酶将DNA序列的特定区 (靶DNA) 扩增数百万〜数十亿倍.。由于可以将少量DNA序列 (仅几个分子) 增加到几毫克,因此可以详细研究靶DNA。

PCR是美国的凯莉·马里斯于1983年发明的技术,并于1986年投入实际应用。由于在促进涉及DNA的分子生物学,遗传学,医学,农业和科学调查等广泛领域的研究方面做出的贡献, Maris先生于1993年获得了诺贝尔化学奖。

在PCR中,首先在DNA序列中确定要扩增的靶DNA。接下来,设计两个称为“引物”的合成DNA,其特异性地结合在靶DNA的两端。该引物是合成新靶DNA的起点。然后,制备催化DNA合成的DNA聚合酶,并将DNA,引物和DNA聚合酶添加到反应液中,其中DNA聚合酶可以在最佳环境中工作。通常,使用含有反应液和DNA聚合酶等的检查公司的检查试剂盒的微管。

将该微管放入叫做热循环器的恒温槽中,通过反复进行热变性 (94~96°C) 、退火 (55~60°C) 、伸长反应 (70~74°C) 3个循环,靶DNA以指数函数的方式扩增。在热变性阶段,被加热的DNA的两条链分离成一条链。在退火中,温度逐渐降低,从而预先放入反应液中的引物与通过热变性形成单链的DNA链的靶DNA结合。在伸长反应中,通过再次提高温度, DNA聚合酶起作用并合成新的DNA分子。以这种方式,以引物为起点的DNA链成为“模板”,并且形成成对的链 (图) 。

国内PCR检查分为感染研究法和直接PCR法两种

PCR是一种扩增靶DNA的技术,但不能扩增RNA.。因此,利用逆转录酶 (reverse transcriptase:RT) 从RNA合成DNA,通过PCR对该DNA进行扩增,由此,即使利用病毒持有的RNA也能够检测出DNA。这是RT-PCR。对于RNA病毒的一种——新型冠状病毒,目前我国正在进行的检查就是这种RT-PCR检查。这三个周期与DNA PCR测试相同。

新型冠状病毒的RT-PCR检测(PCR检测:)有两种方法。一种是基于国立感染症研究所制作的“病原体检测手册”的方法 (感染研法) ,另一种是直接从样本中,同时进行病毒RNA的逆转录和实时PCR的样本直接PCR法。

感染研究法和样本直接PCR法虽然目的相同,但手法不同。首先,目标RNA的扩增位置不同。在感染研究法中,对被称为N组和N2组的新型冠状病毒特异的2处RNA序列进行扩增检测。另外,样本直接PCR法将美国疾病预防控制中心 (CDC) 规定的对被称为N1和N2的新型冠状病毒特异的2处序列作为引物探针 (增殖确认RNA序列所必需的) 进行了扩增。

样品的预处理过程也不同。在感染研究法中,采集样本 (鼻咽拭液和唾液) 后,需要使用专用试剂盒在30分钟左右进行RNA的提取和纯化,如果样本数量多,则需要更多的时间。该方法存在RNA的提取和纯化过程需要一定程度的熟练程度的问题。检体直接PCR法可以通过引物探针,在不进行这一系列的RNA提取、纯化作业的情况下,扩增目标序列。因此,可以直接从标本中检测到新型冠状病毒,大大减轻了工作人员的负担,但标本中含有的各种杂质阻碍了PCR反应,存在假阴性即带病毒但呈阴性的风险。

如果通过PCR检测从样本中检测出新型冠状病毒特异性RNA,则该样本的提供者是PCR检测阳性者。现在有报道称阳性者为“感染者”,但对这一点提出疑问的研究人员不在少数。

首先,存在PCR检查准确性的问题。PCR法中,根据样本采集和样本保存条件等,可能会出现假阳性 (本来不是新型冠状病毒感染症,但判定为阳性) 、假阴性 (本来是新型冠状病毒感染症,但判定为阴性) 。假阴性可能发生在前面提到的PCR检测阶段,也可能发生在不熟悉取样技术的工人不能成功取样的情况下。关于假阳性,它包含各种问题,如下所述。由此可以认为, PCR检查的灵敏度 (感染新型冠状病毒后PCR检查呈阳性的比例) 为70%左右,因此需要慎重地判断和应对检查结果。

 

检查阳性者不一定是感染者

关于假阳性,指出了更多的问题。许多传染病专家强调,“PCR检查阳性者不是新型冠状病毒感染者”。首先,在检查阳性者中有很多无症状的人,但这些人不是感染者。新型冠状病毒只有在侵入体内、在细胞内增殖后才会形成“感染”,但由于人类具有保护自身免受这些病原微生物侵害的免疫功能,因此吸入病毒并不一定会感染。但是,在新型冠状病毒使用的PCR检查中,如果偶尔吸入漂浮在空气中的灭活病毒,并在作为样本的鼻粘膜和唾液中混入多个,就很有可能被判定为阳性。

此外,新冠病毒特有的作为PCR检测靶点的RNA序列也可能存在于其他病毒中,并且包含在过去在海外使用的PCR检测试剂盒的附件中。,有是描述常规冠状病毒、鼻病毒、腺病毒等也是阳性的。
基于这些,CDC基于PCR检测是对某个基因的特定区域进行扩增的检测,并不检测病毒的存在,因此基于PCR试剂盒检测的阳性结果,一种新型冠状病毒感染,据说不能作为治疗的依据。

对有发热等症状的人实施PCR检查是医生确诊的重要工具,但考虑到不一定是阳性=新型冠状病毒感染者,需要慎重判断和应对。

新型冠状病毒的三种检测方法

目前,新型冠状病毒的检测方法有PCR检测、抗原检测、抗体检测。

PCR检测,如本文所述,是一种将微量病毒的RNA片段逆转录到DNA中,然后扩增检测DNA的方法,以确定目前病毒是否存在于体内。标本是抹在鼻子后面的粘液或唾液。

抗原検査は、新型コロナウイルスに対する抗体を用いて抗原(ウイルス表面のタンパク質の断片)を検出する検査。検体はPCR検査と同じく鼻粘膜や唾液。高価な機械や訓練、労力がなくても抗原の検出が可能で、短時間で新型コロナウイルスの新規感染を診断できるとされる。ただし、PCRに比べ、検出にはより多くのウイルス量が必要で、精度は劣る。

抗体检查是一项检查,以确定过去是否感染或已经获得抗病毒抗体,样本是血液。PCR检查和抗原检查是检测病毒及其片段的检查,而抗体检查则是检测感染病毒的人体内产生的抗体,这一点差别很大。

为了控制新型冠状病毒感染症,区分使用这些检查方法,灵活运用于诊断、治疗是很重要的。

厚生劳动省“关于新型冠状病毒感染症检查”的修改